Autoría principal:
Eugenio Hardy Rando
Resumen:
El objetivo de esta investigación fue el desarrollo de un conjunto de técnicas que permiten la detección no destructiva y el recobrado cuantitativo de ácidos nucleicos (ADN, ARN, oligonucleótidos), lipopolisacáridos (LPS)/ lipooligosacáridos (LOS) y proteínas, que satisfagan los requerimientos mencionados anteriormente. El principio físico-químico de los métodos de detección aquí descritos descansa en la habilidad general de las biomoléculas para unir el ion zinc y en la capacidad de las sales de zinc e imidazol para formar complejos moleculares escasamente solubles en agua. Este logro científico consiste en el desarrollo de:
-Nuevas técnicas para la detección reversible y el recobrado con altos rendimientos de ADN, ARN y oligonucleótidos separados en geles de poliacrilamida o de agarosa. Estas técnicas conservan intacta la actividad biológica y permiten resultados superiores a los obtenidos cuando estas moléculas son, detectadas con la técnica tradicional de bromuro de etidio. A diferencia de esta última, la nueva técnica no utiliza reactivos tóxicos, dañinos para el medio ambiente y el operador, y no ocasiona daños sobre las moléculas
en estudio.
-Una nueva técnica para la detección con alta sensibilidad, de lipopolisacáridos y lipooligosacáridos en geles de poliacrilamida. Ha sido diseñada con 'el propósito de poder recuperar estas biomoléculas de los geles y estudi,ar sus propiedades biológicas a continuación.
Un nuevo método para eluir proteínas de los geles de poliacrilamida, que es compatible con el estudio de su actividad biológica y que funciona con muy altos rendimientos a niveles incluso de trazas (10-50 ng de material, 1-5 picomoles). Un nuevo procedimiento para concentrar proteínas contenidas en soluciones diluidas sobre las membranas utilizadas para secuenciación automática, con el fin de determinar la estructura primaria. Este procedimiento, acoplado al método anteriormente mencionado, ha permitido obtener secuencias de proteínas naturales muy escasas.