Autoría principal:
Magalys Campos
Resumen:
La PNK es una enzima de modificación imprescindible para la biotecnología, principalmente en procesos de estudio, clonaje y síntesis de nuevos genes. En Cuba se hizo necesaria la obtención del clon recombinante de este gen, el cual fue amplificado por PCR, y clonado bajo un promotor de expresión. De esta forma, se lograron altos niveles de expresión de la proteína en bacteria, por lo que este resultado constituye el primer y único reporte en la literatura científica, sobre la obtención de clones recombinantes de alta estabilidad génica y actividad biológica de esta enzima en E. coli. Este resultado científico demostró que es posible la expresión de este gen en bacteria, sin efectos de toxicidad alguna para el hospedero bacteriano; y que la destrucción del gen por parte de la bacteria (reportada por investigadores norteamericanos) puede ser evitada manipulando el gen previamente al proceso de clonaje. Modificando el procedimiento original, la enzima se purificó con la utilización de cromatografía de intercambio iónico Sephadex (alto flujo) y Fosfocelulosa (P11). Como último paso de purificación se utilizó TSK -3000 en HPLC. La calidad y estabilidad de la PNK recombinante ha permitido sustituir totalmente las importaciones de esta modalidad de producto en el CIGB. Ha sido ampliamente utilizada por investigadores de este y otros 13 centros de investigación cubanos, además de emplearse en tres hospitales del país. Entre los consumidores extranjeros de la enzima pueden reconocerse 12 países. La calidad de la PNK obtenida está avalada por la Subdirección de Control de la Calidad del CIGB, y es comparable, en todos los parámetros posibles -pureza, estabilidad y seguridad-, con el producto líder en el mercado mundial, de la compañía “Biolabs”. Es una de las enzimas de restricción-modificación más rentables entre las producidas en el CIGB. Su repercusión económica, científica y social también se manifiesta en los logros científicos alcanzados por los proyectos en los que ha sido utilizada, en los sectores de la salud, la industria y la alimentación. Fue posible conocer el carácter determinante de la PNK para la solución experimental de resultados científicos de reconocida importancia nacional e internacional.