(1877 - 1971)
Botánico. Destacado científico que dedicó su vida a estudiar e interpretar la naturaleza cubana y a buscar nuevas fuentes de riquezas naturales; su mayor aporte a la ciencia lo constituyen sus estudios acerca de las plantas medicinales.
Ciencias Biomédicas
1997 | Introducción de la Tecnología de Exposición de Proteínas en la Superficie de Bacteriófagos para la Caracterización de la Interacción Proteína-Proteína y el Diseño de Nuevas Moléculas
Entidad Ejecutora Principal: Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
Autoría principal: Nelson Santiago Vispo
Resumen: El presente trabajo recoge la utilización de la TEPF en: la producción de IL-2 como proteína secretada y activa biológicamente en E. coli, la obtención de una librería de mutantes de IL-2, y la caracterización de los epitopos reconocidos por anticuerpos monoclonales en sus respectivos ligandos. En el último caso, su aplicación permitió corroborar predicciones estructurales y seleccionar potenciales agonistas/antagonistas peptídicos de sus ligandos. Este es el primer reporte de cómo los fagos filamentosos son capaces de exponer la Interleucina-2 humana fusionada a la proteína III, a partir del diseño y construcción de un nuevo péptido de secreción en E. coli. La IL2 expuesta en el fago es biológicamente activa; este hallazgo permitió construir una librería de mutantes de IL2 para la selección tanto de agonistas como de antagonistas de la molécula, potencialmente útiles en la profilaxis y terapéutica del trasplante de órganos, las enfermedades autoinmunes y el control del crecimiento leucémico. El anticuerpo monoclonal CB IL2-1 específico para IL-2 posee actividad neutralizante en ensayos de proliferación celular de la línea murina CTLL-2. Además, se ha utilizado en un modelo de rechazo de trasplante en ratas, donde funciona como antagonista del sistema IL-2. Con la utilización de la TEPF se logró localizar la zona específica dentro de la molécula de IL-2 que reconoce este anticuerpo, la cual se encuentra enmarcada entre los aminoácidos L72 y L80. Esta zona está relacionada espacialmente con el sitio de unión al receptor de IL-2, de ahí el carácter neutralizante de este anticuerpo. Se identificó, además, la región aminoacídica en la molécula de IL2 reconocida por el anticuerpo monoclonal CB-IL2.2; estos aminoácidos se encuentran formando parte de un lazo entre la T101 y la M104. Como no se encuentran reportados los datos de cristalografía de este lazo, se le construyó un modelo tridimensional, donde el epitopo es expuesto favorablemente en la superficie de la proteína. La metodología de exposición de péptidos se presenta en este resultado con un gran valor predictivo, lo que valida el modelo tridimensional teórico de este fragmento de la IL-2. En el caso del anticuerpo monoclonal CB-Hep1, se logró definir la región CKTC del determinante “a”, crítica para el carácter “común” de este, lo que garantiza que durante la inmunopurificación se seleccionen aquellas moléculas de antígeno que expongan adecuadamente esta región, esencial para el desarrollo de una respuesta inmune protectora frente a diferentes subtipos virales. Desde el punto de vista tecnológico, se estableció por primera vez en nuestro país una metodología para la exposición de proteínas y péptidos heterólogos en la superficie de los fagos filamentosos. El sistema es de gran aplicabilidad en el ámbito mundial, en el diseño de nuevas moléculas de uso terapéutico o diagnóstico, y en el mejoramiento de productos recombinantes existentes.
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