Autoría principal:
Gerardo Enrique Guillen Nieto
Resumen:
El presente resultado está relacionado con la rama de la Biotecnología y la Ingeniería Genética, particularmente con la expresión de proteínas heterólogas en microorganismos mediante su fusión, usando la tecnología del ADN recombinante.
El objetivo técnico que se persigue con la solución propuesta, es desarrollar un procedimiento eficaz para la expresión, en Escherichia coli, de proteínas heterólogas como polipéptidos de fusión, con vista a su obtención con un alto grado de pureza, en cantidades comercialmente útiles, y de forma que permita su inclusión en preparados vacunales destinados a humanos.
Se empleó una secuencia estabilizadora, derivada de los primeros 45 aminoácidos del antígeno P64k de Neisseria meningitidis, cepa B:4:P1.19,15. Se obtuvieron construcciones de plasmidios recombinantes que contienen esta secuencia, bajo el control del promotor triptófano de E. coli y del terminador de la transcripción del fago T4, incluyendo sitios de restricción que permiten la clonación en fase de fragmentos de ADN codificantes para polipéptidos de interés.
Empleando este sistema se han expresado varios antígenso de los proyectos Dengue, Hepatitis C, Meningo y SIDA, incluido el candidato vacunal TAB9 de SIDA, actualmente en estudios clínicos. Estos antígenos no se expresan, o se expresan en muy bajos niveles en E. coli al no emplearse construcciones fusionadas.
La principal ventaja sobre otros sistemas es que junto con los altos niveles de expresión (superiores a 20 %) los antígenos se pueden emplear para su uso en humanos, al no interferir con el sistema inmune, a diferencia de la IL-2 que es el sistema que con anterioridad se había obtenido mejores resultados en nuestro Centro.
Este sistema ha sido objeto de una invención de patente en Cuba, en 1996: Sistema de expresión de antígenos heterólogos en Escherichia coli como proteínas de fusión. Patente Cubana CU10/96 (Guillén et al., 1996), la cual también ha sido presentada internacionalmente en enero de 1997 y publicada por el Tratado de Cooperación en Materia de Patentes (PCT), el 24 de julio de 1997. El resultado que se deriva se esta patente es aplicable en la industria farmacéutica, para el desarrollo de sistemas de diagnóstico, de preparados vacunales, y en cualquier situación donde sea necesaria la obtención de grandes cantidades de proteínas heterólogas, como polipéptidos de fusión en E. coli.