(1923 - 2001)
Médico oftalmólogo. Notable científico, conocido internacionalmente por haber concebido un nuevo tratamiento para la retinosis pigmentaria.
Ciencias Agrarias y de la Pesca
2011 | Nuevas tecnologías de amplificación en tiempo real para la detección de virus emergentes que afectan al cerdo
Entidad Ejecutora Principal: Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria
Autoría principal: Lester J. Pérez
Resumen: El diagnóstico y control de enfermedades virales de importancia económica ha progresado de forma notable en la última década gracias a la aplicación de tecnologías de reacción en cadena de la polimerasa basadas en detección de fluorescencia en tiempo real (real-time PCR). Los objetivos del siguiente trabajo fueron desarrollar, optimizar y evaluar nuevos ensayos de PCR en tiempo real basados en formatos de SYBR-Green con parámetros elevados de sensibilidad y especificidad para la detección en muestras clínicas, de virus emergentes como, virus de la peste porcina clásica, circovirus porcino tipo2, virus de la enfermedad de Aujeszky, parvovirus porcino y los recientemente clasificados torque teno sus virus 1 y 2 los cuales todos afectan al cerdo. Así, en el presente estudio, se desarrolló y evaluó un RT-PCR en tiempo real basado en SYBR Green acoplado al análisis de la curva de disociación para la detección específica de la peste porcina clásica que incluye por primera vez a nivel mundial la selección de una diana diferente a la región 5`no traducida que va encaminado a detectar las cepas de este virus que emergieron en el año 2010 y que escaparon al ensayo de referencia internacional. En este ensayo además, se evaluó el desempeño analítico y diagnóstico del ensayo sobre dos equipos específicos de PCR en tiempo real. Se desarrolló, optimizó y evaluó también un sistema de PCR múltiple en tiempo real basado en SYBR Green I acoplado a análisis de curva de disociación para la detección simultánea y diferencial de circovirus porcino 2, el virus de la enfermedad de Aujeszky, el parvovirus porcino y los torque teno sus virus 1 y 2 en cerdos, este ensayo es el primer ensayo documentado en la literatura científica internacional que logra amplificar cinco virus diferentes en un mismo sistema de detección con un solo fluoróforo (SYBR-Green I) ). Este ensayo posee la ventaja de poder evaluar las coinfecciones virales que pudieran estar presentes en un animal en la misma muestra clínica al mismo tiempo y así poder estimar relaciones de patogenicidad entre los agentes a detectar. Se evidenció por primera vez a la comunidad científica internacional, como los diferentes compuestos inhibitorios de las reacciones de amplificación modulan cuantitativamente la sensibilidad analítica de los ensayos y la resolución de la detección de los mismos a través de curvas de disociación. Finalmente la aplicación de estos ensayos desarrollados reveló la presencia de estos agentes virales co-infectando en tejidos linfoides de cerdos del país. Salidas: 1) Pérez L.J, Arce HD, Frias MT, Perera CL, Ganges L, Núñez JI. 2011. Molecular detection of Torque teno sus virus in lymphoid tissues in concomitant infections with other porcine viral pathogens. Research in Veterinary Science. 2011 PMID:21482428 doi:10.1016/j.rvsc.2011.02.012. 2) Pérez LJ., Díaz de Arce H, Tarradas J, Rosell R, Perera CL, Muñoz M, Frías MT, Nuñez JI, Ganges L. Development and validation of a novel SYBR Green real-time RT-PCR assay for the detection of classical swine fever virus evaluated on different real-time PCR platforms. Journal of Virological Method 2011, 174, 53-59.3) 3) Pérez LJ, Perera CL, Frías MT, Nuñez JI, Ganges L, Díaz de Arce H. A multiple SYBR Green I real-time PCR system for the simultaneous detection of porcine circovirus type 2, porcine parvovirus, pseudorabies virus and torque teno sus virus 1 and 2 in pigs. Journal of Virological Method Manuscript VIRMET-D-11-00236R1Accepted Este